The effect of heat shock factor and different methods of cell treating on bacterial transformation efficiency

قضائی, دکتر سیامک (2018) The effect of heat shock factor and different methods of cell treating on bacterial transformation efficiency. University of Mohaghegh Ardabili, University of Mohaghegh Ardabili.

[img] Text
گزارش نهائی طرح.pdf

Download (1MB)
Official URL: http://uma.ac.ir/

Abstract

The molecular transformation of bacterial cells plays a central role in molecular DNA transfer. Currently, the transformation is carried out either by chemical methods or by electric shock (electroporation). The purpose of this study was to investigate the effect of thermal shock factors and different treatment methods on the transformation efficiency in Escherichia coli bacteria, so that there is no need for expensive and specialized tools also having the necessary efficiency. In this method, E. coli cells with different concentrations of peptide CM11 (μg / ml) (0.1, 1, 2, 3 and 5) and lysozyme enzyme (40 mg / ml and 80 mg / ml) based on calcium chloride competency (100 and 200 milligrams) Molar) were treated. They also underwent thermal and cold shock at different temperature intervals, then the plasmid pUC19 (2.7 kbp) was transferred as a model and individually into the susceptible bacteria. The results showed that increasing thermal shock in three temperature intervals of 37.42 ° C and 47 ° C associated with cold shock (0 ° C and 5 ° C) increases the number of transformed colonies and has a significant correlation with transformation (P <0.05). Increasing concentration of calcium chloride is a positive factor ,but by increasing concentration of the enzyme lysozyme was not found statistically significant in transformation(P ˃ 0.05). Increasing the concentration of CM11 peptide showed a significant correlation with transformation (p<0.05). There is no significant relationship between the three methods in transformation (P >0,05). But there is a significant relationship between the use of peptide and enzyme concentration in transformation simultaneously (P˂0.05). This methods is introduced as a simle and convenient way to increase the efficiency of transformation.

Item Type: Other
Persian Title: تاثیر فاکتور های شوک حرارتی و روش های مختلف تیمار سلولی بر روی راندمان ترانسفورماسیون باکتریایی
Persian Abstract: ترانسفورم سازي مولكولي سلول هاي باكتري، نقشي محوري را در انتقالDNA مولكولي ايفا مي كند. در حال حاضر عمل ترانسفورم سازي به روش شيميايي و يا به روش شوك الكتريكي (الكتروپوريشن) انجام مي شود.هدف از تحقيق حاضر تاثیر فاکتور های شوک حرارتی و روش های مختلف تیمار سلولی بر روی راندمان ترانسفورماسیون در باکتری ایشریشیاکلی بود تا ضمن عدم نياز به ابزارهاي گران قيمت و اختصاصي واجد كارايي لازم نيز باشد. در این روش سلول های ایشریشیاکلی با غلظتهای متفاوت پپتیدCM11 µg/ml) 1/0، 1، 2، 3 و 5 (و آنزیم لیزوزیم (mg/ml40 وmg/ml 80) و بر پایه مستعد سازی توسط کلسیم کلراید (100و 200 میلی مولار)، تیمار داده شدند.همچنین تحت شوک حرارتی و سرمایی در بازه های دمایی مختلف قرار گرفتند. سپس پلاسمید pUC19(2.7 kbp) به عنوان مدل و به صورت جداگانه به درون باکتری مستعد شده منتقل گردید. نتایج نشان داد که افزایش شوک حرارتی در سه بازه دمایی C° 37،42 و 47 با شوک سرمایی(0C°و5) منجر به افزایش تعداد کلونی های ترانسفورم شده امی گردد و با ترانسفورماسیون ارتباط معنی داری دارد (P<0.05). افزایش غلظت کلرید کلسیم عامل مثبتی در میزان ترانسفورم سازی بوده ولی بین افزایش غلظت آنزیم لیزوزیم با ترانسفورماسیون ارتباط معنی دار یافت نشد (P ˃ 0.05). افزایش غلظت پپتیدCM11، ارتباط معنی داری با ترانسفورماسیون را نشان داد(p˂0.05). بین سه روش فوق در ترانسفورم سازی ارتباط معنی داری وجود ندارد (P˃0.05). اما بین استفاده از روش غلظت پپتید و غلظت آنزیم در ترانسفورماسیون به طور همزمان ارتباط معنی داری وجود دارد (P˂0.05) . این روش به عنوان يك روش ساده و راحت براي افزایش بازده ترانسفورم سازي معرفي مي گردد.
Subjects: Research Projects
Divisions: Subjects > Faculty of Agriculture and Natural Resources (Moghan Campus) > Department of Animal Sciences
Faculty of Agriculture and Natural Resources (Moghan Campus) > Department of Animal Sciences
Date Deposited: 28 Jun 2019 17:39
Last Modified: 28 Jun 2019 17:39
URI: http://repository.uma.ac.ir/id/eprint/8457

Actions (login required)

View Item View Item