Aghvami Tehrani, Azadeh (2019) Cloning and Expression of Recombinant Human Noggin Protein Fused with GFP spark in Breast Cancer Cell line. Masters thesis, University of Mohaghegh Ardabili.
![]() |
Text
980212_Thesis_Template(1).pdf Download (998kB) |
Abstract
Research Aim:Breast cancer metastasis is the expansion of cancer cells to tissues beyond where the tumor initially forms. During this process, the epithelial cells transform to mesenchymal cells (EMT) by different signaling pathway including TGFβ1 superfamily protein (such as BMPs). This study was aimed at cloning and overexpressing of NOGGIN protein, as a potent BMP antagonist in breast cancer cells. Research method:The human breast cancer cell line, MCF7 was grown in DMEMHG+10% FBS at 37oC with 5% CO2 to reach up to 70-80% confluency. The harvested cells underwent to transient transfection with pCMV3-NOG-GFPspark including GFP as a reporter gene gene which was already transformed in DH5α bacterial cells and subjected to PCR by using the specific primers.Then, the transfected cells examined24h post- electroporation by using epifluorescent microscopy. Findings&Conclusion:pCMV3-noggin-GFPspark had been cloned successfully in DH5α and PCR confirmed the extracted plasmid containing the desired fragment (noggin +GFP sequences). Our results also showed that the highly expression of NOGGIN protein following transient transfection in MCF-7 and expression of the gene were studied by the SDS-PAGE electrophoresis.
Item Type: | Thesis (Masters) | ||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|
Persian Title: | کلون سازی و بیانپروتئینnoggin انسانی نوترکیب متصل به GFP sparkدر رده سلولهای سرطانی سینه | ||||||
Persian Abstract: | هدف:سرطان پستان شایعترین سرطان در بین زنان ایران و جهان می باشد و به عنوان دومین عامل مرگ در دنیا شناخته شده است. یکی از ویژگی های سلولهای سرطانی قابلیت متاستاز آنهاست که عامل بیش از 90% مرگ و میر ناشی از سرطان است. BMPs پروتئینهای مهمی هستند که متعلق به ابرخانواده TGFβ می باشند و نقش مهمی در تنظیم تمایز، تکثیر، حرکت و حیات سلول دارند و به هم خوردن تنظیم آن ها می تواند منجر به تومورزایی و پیشرفت تومور گردد. BMPها بیان بالایی در تومورها دارند. این پروتئینها اثرات متناقضی درسرطان های مختلف و مراحل متعدد آن از جمله در EMT (Epithelial mesenchymal transition) و رگزایی دارند که به ریز محیط توموری بستگی دارد؛ بعبارت دیگر بسته به نوع سرطان هم می توانند تحریک کننده و هم مهار کننده باشند. BMP4 می تواند تهاجم و تخریب ماتریکس در سرطان پستان را از طریق افزایش بیان MMP2 و MMP9 تحریک کند و در انواع متعدد رده های سلولی سرطان پستان باعث مهاجرت می گردد. NOGGIN یک مولکول پیام رسان است که BMP4 را در طول تکوین مهار می کند.پلی پپتید ترشحی NOGGIN به اعضای ابرخانواده TGFβ از جمله BMP2، BMP4و BMP7 متصل می شود و آنها را غیر فعال می کند واز اتصال آنها به گیرنده شان ممانعت می کند در واقع آنتاگونیست BMP هاست. روششناسی پژوهش:در این مطالعه وکتور بیانی pCMV3-C-GFPspark حاوی cDNANoggin انسانی تهیه شد. پس از انتقال DNA نوترکیب به درون باکتری Ecoli DH5α تکثیر پلاسمید همراه با cDNA Noggin انجام شد و خالص سازی پلاسمید صورت گرفت، سپس پلاسمید نوترکیب خالص شده به درون رده سلولهای سرطانی پستانی MCF7 ازطریق الکتروپوریشن منتقل شد. یافتهها و نتیجه گیری:ژن Noggin به صورت متصل به GFPspark در درون سلولهای MCF7 بیان شد و به خاطر وجود این مارکر فلورسانس، بر اساس تراکم نقاط سبز رنگ در درون سلولهای MCF7 توسط میکروسکوپ فلورسانس شناسایی شد. وجود این پروتئین از طریق SDS-PAGE نیز رهگیری گردید. | ||||||
Supervisor: |
|
||||||
Advisor: |
|
||||||
Subjects: | Faculty of Basic Sciences > Department of Biology Divisions > Faculty of Basic Sciences > Department of Biology |
||||||
Divisions: | Subjects > Faculty of Basic Sciences > Department of Biology Faculty of Basic Sciences > Department of Biology |
||||||
Date Deposited: | 31 May 2020 04:10 | ||||||
Last Modified: | 31 May 2020 04:10 | ||||||
URI: | http://repository.uma.ac.ir/id/eprint/11316 |
Actions (login required)
![]() |
View Item |