Molecular Study and optimization alkaline protease from bacillus isolates

رجبلو, حميدرضا and زهري, دکتر صابر and اسدي, دكتر اسدالله (2011) Molecular Study and optimization alkaline protease from bacillus isolates. Masters thesis, University of Mohaghegh Ardabili.

[img] Text
مقدمه.pdf

Download (805kB)
Official URL: http://uma.ac.ir/

Abstract

Proteases are one of the industrially most important enzymes. Protease have found a wide range of applications in various industries such as food, detergent, pharmaceutical, leather, etc. They are usually produced by bacteria belong to the genus Bacillus for industrial application. In this study, an alkaliphilic protease producing bacterium, Bacillus sp. , was isolated from sabalan spring. The enzyme was active in the pH 7-12, with optimum activity at pH 9, although a small peak at pH 4 was also observed, Suggesting a presence of two protease. The enzyme was active in the temperatures range of 20-90˚C with maximum activity at 60˚C. The protease was markedly inhibited by Zn+2, Ba+2, Cu+2, Co+2; while partially inhibited by Fe+2, Na+2. Also Mn+2, Mg+2 and Ca+2 stimulated the enzyme activity. The crude enzyme preparation show many protein bands. Of the inhibitor tested (at 5mM concentration), EDTA was able to inhibit the protease, while PMSF exhibited partially inhibition. It can, therefore, be concluded that the protease studied in the present case, is a metal-activated enzyme with a loose interaction with metal, and which seems to have a serine residue at the active site. The km and specific activity of that on soluble casein were 1.625 mg/ml and 11443.082 U/mg, respectively. The enzyme had good biochemical characteristic such as stability in high temperatures and pH.

Item Type: Thesis (Masters)
Persian Title: بررسی مولکولی و بهینه سازی تولید آنزیم آلکالین پروتئاز در ایزوله¬های باسیلوس
Persian Abstract: پروتئازها یکی از مهمترین آنزیم¬های صنعتی هستند. پروتئازها دارای کاربردهای زیادی در صنایع گوناگونی همچون صنایع غذایی، شوینده¬ها، داروسازی، چرم و غیره می¬باشند. این آنزیم¬ها معمولاً برای مصارف صنعتی به-وسیله¬ی باکتری¬هایی که متعلق به جنس باسیلوس هستند تولید می¬شوند. در این مطالعه، پروتئاز قلیایی تولید شده توسط سویه¬ی RZ1 باسیلوس از چشمه¬های سبلان جداسازی شده بود. آنزیم در محدوده¬ی pH از 7 تا 12 فعال بود و بهترین فعالیت را در pH برابر با 9 داشت، اگرچه یک پیک کوچکی نیز در pH برابر با 4 مشاهده شد که این حضور 2 نوع پروتئاز را پیشنهاد می¬کرد. آنزیم در محدوده¬ی دمایی 20 تا 90 درجه¬ی سانتی¬گراد فعال بود و در 60 درجه¬ی سانتی¬گراد بیشترین فعالیت را داشت. پروتئاز بطور ویژه¬ای در حضور Zn+2،Ba+2،Cu+2 وCo+2 مهار شده درحالی¬که بطور نسبی توسط Fe+2 وNa+2 مهار می¬شد. همچنین Mn+2، Mg+2 وCa+2 فعالیت آنزیم را تقویت می¬کردند. بررسی پروفایل پروتئین¬های ترشحی در سطح SDS-PAGE نشانگر تعداد بسیار زیادی باند پروتئینی بود. بررسی اثر مهارکننده¬ها در غلظت 5 میلی¬مولار نشان داد که EDTA قادر به مهارکردن پروتئاز بود درحالی¬که PMSF مهار نسبی¬ای داشت. این نتایج نشان ¬داد که پروتئاز مورد مطالعه یک متالو آنزیم است. برخی برهم¬کنش¬ها سبب کاهش فعالیت آن می¬شود که به¬نظر می¬رسد یک ریشه¬ی سرین در جایگاه فعالش دارد.Km و فعالیت ویژه¬ی آن بر روی کازئین محلول به¬ترتیب mg/ml 625/1 و U/mg 082/11443 بود. این آنزیم دارای خصوصیات بیوشیمیایی خوبی همچون پایداری در دماها و pH های بالا بود.
Supervisor:
SupervisorE-mail
زهري, دکتر صابرUNSPECIFIED
Advisor:
AdvisorE-mail
اسدي, دكتر اسداللهUNSPECIFIED
Subjects: Faculty of Basic Sciences > Department of Biology
Divisions > Faculty of Basic Sciences > Department of Biology
Divisions: Subjects > Faculty of Basic Sciences > Department of Biology
Faculty of Basic Sciences > Department of Biology
Date Deposited: 10 Jul 2019 05:33
Last Modified: 10 Jul 2019 05:33
URI: http://repository.uma.ac.ir/id/eprint/7679

Actions (login required)

View Item View Item